BOD五日生化測定儀基于水體中微生物分解有機物的生化過程，通過測定五日培養前后的溶解氧變化，計算生化需氧量（BOD5），其測定方法需遵循嚴格的操作流程，確保微生物活性與反應條件穩定。

樣品預處理是測定的基礎環節。首先需調節水樣 pH 值至 6.5-7.5，若水樣酸性或堿性過強，需用稀鹽酸或氫氧化鈉溶液中和，避免 pH 值異常抑制微生物活性。隨后進行水樣稀釋，根據預估 BOD5 濃度選擇合適稀釋倍數 —— 若濃度未知，需設置 3-4 個稀釋梯度，稀釋水需提前經曝氣充氧（溶解氧濃度≥8mg/L），并加入磷酸鹽緩沖液、硫酸鎂等營養鹽，維持微生物代謝所需環境。稀釋過程需緩慢攪拌，避免產生氣泡，稀釋后的水樣溶解氧需保持在 7-8mg/L，若溶解氧不足需再次曝氣補充。

培養測定需嚴格控制環境條件。將稀釋后的水樣分裝至培養瓶，裝滿后溢出部分水樣以排除瓶內空氣，立即加蓋密封，防止外界氧氣進入。同時準備空白樣（僅含稀釋水），與水樣同步處理。將培養瓶放入 BOD 測定儀的恒溫培養箱，設置溫度為 20℃±1℃，培養周期為 5 天。部分儀器采用壓力傳感法，通過監測培養瓶內壓力變化（微生物耗氧導致壓力下降）直接記錄數據；傳統容量法需在培養前后分別測定水樣溶解氧，培養前測定需在分裝后 1 小時內完成，培養后需避免光照干擾，測定時輕緩操作防止瓶內氧氣與外界交換。

數據計算需按標準公式執行。壓力傳感法儀器可自動計算 BOD5 值，無需手動干預；容量法需先計算水樣與空白樣的溶解氧差值，再扣除空白消耗，結合稀釋倍數得出結果。計算公式為：BOD5（mg/L）=（水樣培養前后溶解氧差值 - 空白差值）× 稀釋倍數。若多個稀釋梯度均有有效數據，需選擇溶解氧消耗在 2mg/L 以上且剩余溶解氧≥1mg/L 的梯度計算，取平均值作為最終結果。計算完成后需驗證數據有效性，空白樣 5 天溶解氧消耗應≤0.5mg/L，否則說明稀釋水受污染，需重新測定。

測定過程中需注意微生物活性維護，若水樣含殺菌劑等抑制物質，需加入馴化后的微生物菌種或延長馴化時間；若水樣為工業廢水，需提前進行預處理去除毒性物質。培養期間需確保儀器恒溫系統穩定，避免溫度波動影響微生物代謝速率。通過規范執行預處理、培養及計算步驟，BOD 五日生化測定儀可準確反映水體中可生物降解有機物的含量，為水質污染評估提供可靠依據。